近些年来,流式细胞分析技术已经成为细胞生物学、肿瘤学、免疫学等基础和临床医学领域中的一项新的有效工具。本章 主要介绍流式细胞分离及分析的基石原理、流式细胞计的基本结构和操作、流式细胞术在免疫细胞化学中应用的技术思路、途径和方法,以及它们在临床医学中的应用。对FCM在外周血白细胞的免疫组织化学分析方面的应用作重点介绍。
1.组织加工 有人提出用冰冻切片进行CEA免疫细胞化学染色。由于非特异性荧光和需要一定设备条件,有人改用福尔马林固定和胰酶消化的方法。从我们的体会看,福尔马林固定后的切片CEA的部分抗原决定簇被遮盖,阳性结果显着受到影响。但是用冷酒精固定后的组织切片,CEA的阳性率明显升高,而且结果仍很清晰。goldenbery等同时进行CEA酶标记组织,而福尔马林固定的组...
胃肠道与外界相通,其粘膜表面附着各种细菌和病毒。粘膜含有各种组织溶解酶,而且胃粘膜呈酸性,肠粘膜偏碱性,因此在进行免疫细胞化学染色过程中,必须注意以下几个环节 :
胃肠道(包括胆囊及肝外胆道)的植物性神经分布有二个来源:①外源性神经(extrinsic nerve),指神经来自胃肠道以外的其它部位。②内源性神经(intrinsic nerve),指神经来自胃肠及胆道壁内的神经丛。要应用免疫细胞化学技术对消化道内源性神经进行研究,必须先了解消化管壁内神经丛的结构。
(1)组织切片脱蜡入水,0.01mol/l pH7.4 PBS洗; (2)用4%正常 羊血 清封闭组织37℃ ,30min。 (3)分别以第一抗体孵育组织,4℃24h,PBS振洗10min×3; (4)用胶体铁标记的第二抗体37℃孵育30min或用桥抗联接胶体铁标记物; (5)蒸馏水洗; (6)以1%的亚铁氰化钾与1%盐酸混合液显色20in; (7)自来水洗...
目前已有多种PcAb和McAb用于汗腺及汗腺肿瘤的研究,这些不同的抗体对汗腺的不同部位有特异性反应,主要用于探讨汗腺肿瘤的组织发生,分化特点以及诊断及鉴别诊断。同时也可用于外科手术切除时,迅速判断肿瘤是否切除干净。现将不同的抗体分述如下。 1.癌胚抗原(CEA) 出已证明在大小汗腺的腺体及导管部均有CEA。在各种汗腺的良恶性肿瘤中也有不同的表达形式。CEA在...
免疫细胞化学技术已被广泛应用于皮肤科学领域,尤其在皮肤科的自身免疫性疾病如 天疱疮 、 大疱性类天疱疮 、 红斑狼疮 的诊断、病情和疗效判定及发病机理的研究方面,起着重要作用。现将免疫细胞化学在皮肤病学的应用简要介绍如下。
恶性淋巴瘤 总的可分为非何杰金 淋巴瘤 (NHL)与何杰金氏病两大部分。NHL的免疫功能分类繁多。总体上各类型的瘤细胞的免疫细胞化学标记与相应的正常细胞标记相一致。但是由于瘤细胞的基因有变异,分化不正常,其抗原性也发生变化。因此瘤细胞比相应正常细胞的表达要弱或丧失。在此不分型描述,而从应用角度分为下列三方面进行讨论:
Merkel细胞系1975年Merkel在真皮交界处发现的一种比周围基底细胞淡染的细胞,此种细胞与神经髓鞘接触,认为是触觉细胞,并发现其能促进所有特化的感觉功能所接受和传导,这种功能不需触觉小体或环状小体介导。后来在电镜下观察到Merkel细胞内含神经内分泌颗粒,组织化学和免疫组化观察到其含有与神经组织有关的酶如特异性乙酰胆硷酯酶三磷酸核苷酶、神经特异性烯醇...
人体存在两种形式分布的内分泌细胞,一种是内分泌细胞群集形成内分泌器官,如垂体等,另一种是内分泌细胞单个散在于其它组织细胞之间,形成弥散的内分泌系统(diffuse en-docrine system)。通过免疫细胞化学方法及超威结构观察,人们对内分泌细胞的分布形态与功能等不断有新的发现。1968年,Pearse观察到体内一些分泌肽类物质的细胞具有共的细胞化学...
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