编码低密度脂蛋白受体（LDL-R）的基因5'侧翼区，具有一个长10个碱基对的胆固醇调节组件1（sterol regulatory element 1,SRE-1）。SRE-1是一个条件正性调节组件，仅在细胞内胆固醇缺乏的条件下，才被激活。在其他的胆固醇调节基因如羟甲基戊二酸单酰CoA合酶（HMGCoa synthase ）基因的启动子中也含有SRE-1，而在...
1．目的基因的设计 在进行转基因动物研究时，首先要针对实验目的设计待转移的目的基因，如随机整合型基因或基因敲除（gene knockout）型载体基因。随机整合型基因可来自于同一基因，也可来自于不同基因（拼接基因）。从结构上看，随机整合型基因可分为结构基因与调控序列两部分。若来自于同一个基因，那么该基因必须完整，包括5'上游启动子区和3'下游的加尾信号（po...
...值，再加水到1L。 溶液①（d=1.006）:NaCl 11.40g,0.5ml0.5mol/L EDTA液，加去离子水1l，EDTA可抑制脂蛋白中脂质的氧化。 溶液②（d=1.182）:NaBr24.98g溶于溶液①100ml中。 溶液③（d=1.478）:NaBr78.32溶于溶液②100ml中。 0.15mol/LNaCl,0.3mlEDTA:8.77...
目前对于基因序列的突变分析国内外多采用直接测序方法，直观又准确。例如，1996年Sakai等报道了对高α脂蛋白血症患者CETP基因内含子10和内含子14片段序列的突变分析。其方法为：采取患者全血根据Kunkel等方法准备基因DNA；CETP基因内含子10的splice donor位点的PCR扩增引物为：5'-CCCTGCGAATTCTTCTTCTGAGGAG...
...Manual ColdSping Harbor NY:Cold Spring Harbor Lab,1986,332-340 2.琦祖和，转基因动物技术，中华病理学杂志，1993，22：375 3.GordonJW ,Scangos GA,Plotdin DJ,et al Genetic transformation of mouse embryos byo...
（一）原理 以聚丙烯酰胺为支持介质，血清脂质用染料预染，使脂蛋白着色，经电泳后，一般可分出三条区带，即β-、前β-、α-脂蛋白。并可用光密度扫描仪检测其相对百分数，乘以总脂量，可求出三种脂蛋白的含量。 （二）试剂与仪器 1．试剂 （1）分离胶缓冲液：三羟甲基氨基甲烷（Tris）18.3g,lmol/L盐酸24ml，加水至100ml(pH8.9)。 （2）丙烯...
....操作 混合血清在3000r/min下，离心30min，除去血细胞及其他固体物质，再以2000r/min离心30min（4℃），以除去血清中的CM。 取一定体积的上述血清，加1%DS，使血清中的DS浓度为0.05%，加2mol/lCaCl 2 ，使血清中CaCl 2 的终浓度为0.1mol/L，搅拌后放4℃冰箱过夜，于第二天离心（3750r/min）30mi...
随着分子生物学的发展和脂代谢相关蛋白基因的克隆，序列测定及表达调控组件研究的深入，为探讨载脂蛋 白及 其他脂代谢相关蛋白和AS的关系，以期建立As TGM模型奠定了基础。现已对ApoAⅠ、AⅡ、AⅣ、B、CⅠ、CⅢ、E和Apo（a），以及LDL-R、CETP、LRP及LPL等进行了转基因动物研究，先后建立了各种TGM模型。为深入了解脂蛋白运输基因如何调控以及...
采用聚合酶链反应（PCR）限制性片段长度多态性（RFLP），即PCR-RFLP技术从基因水平检测ApoE基因多态性（基因型），操作简便、快速准确。 1．仪器与试剂 （1）仪器：电泳仪、基因扩增仪； （2）试剂：Taq DNA聚合酶、dNTPs、DNA参考物（pBR322DNA/HacⅢmarkers）、HhaⅠ，其余试剂均为分析纯。 2．实验方法 （1）引物...
蛋白质溶液浓度测定方法有多种，下述几种方法可供选用。蛋白质浓度的测定，往往用于计算纯化方法的回收率的重要方法。 一、双缩脲法 双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，至令仍广泛采用。在需要快速，但不很准确的测定中，常用此法。硫铵不干扰显色，这对蛋白质提纯的早期价段是非常有利的。双缩脲法的原理是Cu2+与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成 紫蓝 色络...
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