在同一标本上有两个抗原需要同时显示（如A抗原和B抗原），A抗原的抗体用FITC标记，B抗原的抗体用罗达明标记，可采用以下染色方法： 1．一步法双染色 先将两种标记抗体按适当比例混合（A+B），按直接法进行染色。 2．二步法双染色 先用RB200标记的B抗体染色，不必洗去，再用FITC标记的A抗体染色，按间接法进行。 结果：A抗原阳性荧光呈现绿色，B抗原阳性呈...
..., TRITC) TRITC为罗丹明的 衍生物 ，呈紫红色粉末，较稳定。最大吸收光波长为 550nm，最大发射光波长为620nm，呈现橙红色荧光，与FITC的翠绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比 染色 。因其荧光淬灭慢，也可用于单独标记染色。 酶作用后产生荧光的物质 某些 化合物 本身无荧光效应，一旦经酶作用便形成具有强荧光的物质。例如，4-甲基伞酮...
..., TRITC) TRITC为罗丹明的 衍生物 ，呈紫红色粉末，较稳定。最大吸收光波长为 550nm，最大发射光波长为620nm，呈现橙红色荧光，与FITC的翠绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比 染色 。因其荧光淬灭慢，也可用于单独标记染色。 酶作用后产生荧光的物质 某些 化合物 本身无荧光效应，一旦经酶作用便形成具有强荧光的物质。例如，4-甲基伞酮...
应用于电镜水平的免疫法，可分为包埋前染色和包埋后染色，由于包埋前染色对细胞膜的穿透性差，一般只用于细胞表面的抗原标记，如需穿透细胞膜，则需辅以冻融法或加入Triton X—100、皂素等活性剂，后者会加重细胞超威结构的破坏，因此，现较普遍采用包埋后染色，现分别介绍如下：
...：100）室温30min。 （5）DAB·4HCl/H 2 O 2 (0.05%/0.01%)，室温1.5min。上述每一步骤后应用PBS洗涤（5min×3次）。 （6）在解剖显微镜下检出免疫反应阳性部位，修整组织，用0.1mol/L磷酸缓冲液稀释的1%锇酸（pH7.4）后固定30min～1h。 （7）按常规电镜样品制备， 脱水 、包埋、超薄切片、染色观察。
（1）将载有切片的镍网（或金网）在5%的H 2 O 2 液中蚀刻（etch）2～3min。生理盐水冲洗，滤纸吸干。 （2）正常 羊血 清用0.05mol/L Tris盐液（TBS）稀释成1：30，pH7.0，室温5min 。 （3）兔抗血清（第一抗体），内含1%正常 羊血 清，用0.05%mol/l Tris缓冲液稀释，pH7.6,4℃，48h后以Tris缓
（1）1mm厚组织块，在4 ℃ 下用固定液固定后，置于含4.5%的蔗糖PBS（0.05mol/l pH7.2），4 ℃ 中漂洗，换数次固定液，过夜。 （2）随后，作10～40μm的冰冻切片，放入第一抗体血清作用12～18h，4℃，用含蔗糖的PBS洗数次。 （3）置于HRP标记抗体液（第二抗体）4 ℃ 过夜。然后用4℃含蔗糖PBS反复冲洗数次。4 ℃ 浸漂过夜
（1）用4%多聚甲醛（在0.05mol/l 磷酸缓冲液中，pH7.2）在原位固定（4 ℃ ）1h。 （2）用0.05mol/l PBS充分洗涤后，用HRP标记的抗体血清作用18h，再用PBS充分洗涤。 （3）2%戊二醛固定1h，再水洗。 （4）呈色反应，用DAB—H 2 O 2 呈色反应，水洗。 （5）1%锇酸后固定30min～1h，原位用环氧树脂包埋，光镜
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