荧光免疫技术是标记免疫技术中发展最早的一种。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记而获得成功。这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术(fluorescentantibodytechnique)。 由于一般荧光测定中的本底较高等问题...
某些抗原可以用荧光素标记,制成荧光抗原,标记荧光素的方法与制备荧光抗体方法相同。用荧光抗原可以直接检查细胞或组织内的相应抗体,特异性较好,敏感性较差。染色方法同荧光抗体染色的直接法。由于多数抗原难以提纯或量少不昂贵,一般很少采用此法。
对制备的荧光抗体必须进行质量鉴定,主要进行特异性和敏感性两个方面的鉴定。
先测定荧光抗体特异性染色与非特异性染色的效价,若二者效价相差较大,则可将荧光抗体稀释至一临界浓度,使特异性染色呈阳性,而使非特异性染色保持阴性,稀释方法和染色效价测定方法相同。
荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)是一种间接荧光抗体法。试验前先用Reiter密螺旋体超声波裂解物处理病 人血 清,除去其中具有交叉反应的抗体后,再与 梅毒 螺旋体作用,然后加用荧光素标记的抗人IgG。此法敏感性高、特异性强,能最早检测出梅毒螺旋体的特异性抗体。但操作复杂,且病人经过药物治疗后反应仍持续阳性。因此,不适于判断疗效。如需判定疗效,可参考...
荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)是一种间接荧光抗体法。试验前先用Reiter密螺旋体超声波裂解物处理病 人血 清,除去其中具有交叉反应的抗体后,再与 梅毒 螺旋体作用,然后加用荧光素标记的抗人IgG。此法敏感性高、特异性强,能最早检测出梅毒螺旋体的特异性抗体。但操作复杂,且病人经过药物治疗后反应仍持续阳性。因此,不适于判断疗效。如需判定疗效,可参考...
免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物,再用这种荧光抗体(或抗原)作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素,利用荧光显微镜观察标本,荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光(黄绿色或桔红色),可以看见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体的性质、定位,以及...
荧光显微镜所看到的荧光图像,一是具有形态学特征,二是具有荧光的颜色和亮度,在判断结果时,必须将二者结合起来综合判断。结果记录根据主观指标,即凭工作者目力观察。作为一般定性观察,基本上可靠的。随着技术科学的发展,在不同程度上采用客观指标记录判断结果,如用细胞分光亮度计,图像分析仪等仪器。但这些仪器记录的结果,也必须结合主观的判断。 荧光显微镜摄影技术对于记录荧...
在同一细胞组织标本上需要同时检查两种抗原时,要进行双重荧光染色,一般均采用直接法,将两种荧光抗体(如抗A和抗B)以适当比例混合,加在标本上孵育后,按直接法洗去未结合的荧光抗体,抗A抗体用异硫氰酸荧光素标记,发黄绿色荧光;抗B抗体用TMRITC或RB200标记,发红色荧光,可以明确显示两种抗原的定位。
(一)抗体的荧光素标记 用于标记的抗体,要求是高特异性和高亲和力的。所用抗血清中不应含有针对标本中正常组织的抗体。一般需经纯化提取IgG后再作标记。作为标记的荧光素应符合以下要求:①应具有能与蛋白质分子形成共价健的化学基团,与蛋白质结合后不易解离,而未结合的色素及其降解产物易于清除。②荧光效率高,与蛋白质结合后,仍能保持较高的荧光效率。③荧光色泽与背景组织的...
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